Aller au contenu. | Aller à la navigation

Outils personnels

This is SunRain Plone Theme

Navigation

Vous êtes ici : Accueil / Actualités / Analyse protéomique des endosulfatases humaines HSulfs, enzymes clés de la modulation de la sulfatation de l’héparane sulfate Thèse soutenue par I. Seffouh le 31 aout 2018 à l’Université Evry-Val-D’Essonne

Analyse protéomique des endosulfatases humaines HSulfs, enzymes clés de la modulation de la sulfatation de l’héparane sulfate Thèse soutenue par I. Seffouh le 31 aout 2018 à l’Université Evry-Val-D’Essonne

Analyse protéomique des endosulfatases humaines HSulfs
Analyse protéomique des endosulfatases humaines HSulfs, enzymes clés de la modulation de la sulfatation de l’héparane sulfate Thèse soutenue par I. Seffouh le 31 aout 2018 à l’Université Evry-Val-D’Essonne

Domain organization of HSulf-2 and MALDI-TOF mass spectrum of HSulf-2 (positive ionization mode) Domains from N- to C terminus are displayed with their four ending residues: signal peptide (orange, 24 aa); catalytic domain (dark blue, 391 aa); hydrophilic

Les 6-O-endosulfatases HSulf-1 et HSulf-2 (HSulfs) catalysent l’hydrolyse régio-sélective du groupe 6-O sulfate des résidus glucosamine sulfatés de l’héparane sulfate (HS), assurant ainsi une modification post-synthétique unique de ce glycosaminoglycane constitutif des protéoglycanes de la surface cellulaire. Par cette action, les HSulfs modulent les propriétés d’interaction de HS avec un grand nombre de ligands, faisant de ces enzymes des acteurs cruciaux dans de nombreux processus physiopathologiques. Ainsi, un grand nombre d’études a souligné le rôle physiologique de HSulf-2 ainsi que son implication dans des processus pathologiques, en particulier du cancer. HSulf-2 est ainsi proposée comme une cible thérapeutique prometteuse dans la recherche anti-cancéreuse. Néanmoins, à l’heure actuelle, aucune structure cristallographique d’endosulfatase Sulf-2 n’a été décrite. Dans son travail de thèse, I. Seffouh a présenté la première caractérisation par spectrométrie de masse (MS) de HSulf-2. HSulf-2 s’est révélé un objet protéique difficile à détecter et analyser à l’échelle de la molécule entière par spectrométrie de masse. Les résultats obtenus ont permis d’établir les conditions optimale d’analyse par MS MALDI-TOF. Une masse moléculaire moyenne de 133115 g.mol-1 a été déterminée pour l'enzyme entière par MS MALDI-TOF. Cette masse expérimentale plus élevée que la masse théorique (98169,86 g.mol-1) déduite de la séquence en acides aminés, souligne la contribution significative de modifications post-traductionnelles (MPTs) à la masse moléculaire de HSulf-2. Les conditions de protéolyse par différentes protéases sont également décrites afin d’obtenir la couverture de séquence la plus complète. La séquence protéique de HSulf-2 a été confirmée par analyse nano-LC-MS/MS, ce qui a permis de localiser quatre sites de N-glycosylation (N108, N147, N174 et N217) sur les sept sites potentiels de la chaîne longue. L’ensemble de ces résultats fournit les bases bioanalytiques solides pour la poursuite de la caractérisation structurale des enzymes HSulfs. visant à comprendre en particulier l’organisation des deux chaînes de HSulf-2, et à déchiffrer leur rôle dans la liaison au substrat et dans la formation de la poche catalytique.